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熒光測試方法


熒光在時域上主要分為穩(wěn)態(tài)熒光測試和瞬態(tài)熒光測試兩大類。
 

穩(wěn)態(tài)測試是用連續(xù)光源激發(fā)樣品,樣品分子不斷吸收能夠從基態(tài)躍遷至激發(fā)態(tài),再由激發(fā)態(tài)返回基態(tài),在此過程以發(fā)光形式釋放能量,產生熒光。
 

由于光源的不斷激勵,所以放光過程是連續(xù)的、穩(wěn)定的,被稱為穩(wěn)態(tài)光譜;通過光譜的位置、形狀我們可以分析樣品的內部結構、能級分布、甚至結構是否存在缺陷。
 

穩(wěn)態(tài)光譜,又可以分為激發(fā)光譜、發(fā)射光譜、同步光譜、三維光譜等。
 

(1)激發(fā)光譜:發(fā)光材料在不同波長光的激發(fā)下,該材料的某一發(fā)光譜線與譜帶的強度或發(fā)光效率與激發(fā)光波長的關系。
 

(2)發(fā)射光譜:發(fā)光材料在某一激發(fā)光的激發(fā)下,其不同波長的發(fā)光強度的強弱變化。
 

(3)同步光譜:發(fā)射波長與激發(fā)波長保持固定的間隔同時掃描,用于獲取樣品不同的吸收與發(fā)射峰相對位置。
 

(4)三維光譜:以不同的激發(fā)波長激勵樣品,掃描樣品的發(fā)射光譜,其結果可以直接反映樣品被不同波長的激發(fā)光激發(fā)下的熒光發(fā)光特性。
 

瞬態(tài)熒光是用脈沖光源激發(fā)樣品,樣品分子被瞬時光源從基態(tài)激發(fā)至激發(fā)態(tài),在激發(fā)態(tài)的分子由于弛豫時間不同(在激發(fā)態(tài)的停留時間不同),在不同時刻返回基態(tài),同樣的返回基態(tài)時會以光的形式釋放能量,通過獲取不同時刻的發(fā)光信息,得到的時域光譜就是樣品的衰減曲線,也即是瞬態(tài)光譜,再通過對衰減曲線的擬合,得到樣品分子的壽命。
 

瞬態(tài)光譜,可以分為衰減曲線,時間分辨光譜等。
 

(5)衰減曲線:用確定波長的脈沖光源激勵樣品,獲取樣品特征波長的熒光衰減曲線,再經過擬合,得到樣品的額壽命。
 

(6)時間分辨光譜:用確定波長的脈沖光源激勵樣品,獲取樣品在其發(fā)光波段內的熒光衰減曲線,通過時間切份、強度積分得到不同時間段的時間分辨光譜。
 

以穩(wěn)態(tài)、瞬態(tài)熒光為基礎,配合不同的外部實驗環(huán)境和方法,比如低溫臺、壓力裝置、磁體,可以得到不同溫度下、壓力下、磁場下的熒光光譜;如果配合顯微光路,通過選擇適合的光路、物鏡,可以得到樣品表面分辨率高達1μm的顯微光譜或影像。